中国农业科技导报 ›› 2022, Vol. 24 ›› Issue (8): 124-132.DOI: 10.13304/j.nykjdb.2021.0958
刘艳(), 鲍红帅, 尚红燕, 王国宁, 张艳, 王省芬, 马峙英, 吴金华(
)
收稿日期:
2021-11-09
接受日期:
2022-02-07
出版日期:
2022-08-15
发布日期:
2022-08-22
通讯作者:
吴金华
作者简介:
刘艳 E-mail:1297732142@qq.com;
基金资助:
Yan LIU(), Hongshuai BAO, Hongyan SHANG, Guoning WANG, Yan ZHANG, Xingfen WANG, Zhiying MA, Jinhua WU(
)
Received:
2021-11-09
Accepted:
2022-02-07
Online:
2022-08-15
Published:
2022-08-22
Contact:
Jinhua WU
摘要:
枯萎病是棉花生产的主要病害之一,枯萎病菌的培养对枯萎病抗性鉴定至关重要。针对5个不同来源(河北曲周、鸡泽、保定、乌鲁木齐及中国农业科学院植物保护研究所,分别命名为QF、JF、BF、WF、PF)的枯萎病菌7号生理小种,设置了8种培养基及2个培养温度处理,研究菌的生长速率、产孢数及孢子的致病力,以筛选适宜的枯萎病菌及其培养条件。结果表明:枯萎病菌BF产孢量最大,棉花枯萎病感病品种冀棉11接菌QF、JF、BF以及WF 35 d后仍未发病或者发病不明显,PF致病力最强且使冀棉11在接菌后25~30 d出现枯萎病症状;Czapek固体培养基培养的菌落生长速率为1.29 cm·d-1,显著高于其他培养基;PSA-200固体培养基上培养的枯萎病菌产孢量显著高于PSA-75和Czapek,PSA-200总产孢量最大,Czapek总产孢量最小;Czapek液体培养基产孢数显著高于其他培养基且培养4 d为宜,但培养温度25和30 ℃之间产孢量差异不显著。该结果为棉花枯萎病菌筛选及其培养提供参考依据。
中图分类号:
刘艳, 鲍红帅, 尚红燕, 王国宁, 张艳, 王省芬, 马峙英, 吴金华. 棉花枯萎病菌及其培养条件筛选[J]. 中国农业科技导报, 2022, 24(8): 124-132.
Yan LIU, Hongshuai BAO, Hongyan SHANG, Guoning WANG, Yan ZHANG, Xingfen WANG, Zhiying MA, Jinhua WU. Selection of Cotton Fusarium Wilt and Culture Conditions[J]. Journal of Agricultural Science and Technology, 2022, 24(8): 124-132.
级别 Grade | 症状 Symptom |
---|---|
0 | 没有发病,植株健康 No disease, healthy plant |
1 | 1~2片子叶表现病状,子叶变黄,真叶不显病状 1~2 cotyledons show disease symptoms, cotyledons turn yellow, true leaves do not show disease symptoms |
2 | 子叶和1片真叶表现病状Cotyledon and 1 true leaf show disease symptoms |
3 | 2片真叶表现病状 2 true leaves show symptoms |
4 | 全部叶片表现症状,严重时叶片脱落,顶心枯死 All leaves show symptoms, the leaves fall off and the top heart is dead when serious |
表1 分级标准
Table 1 Grading criteria
级别 Grade | 症状 Symptom |
---|---|
0 | 没有发病,植株健康 No disease, healthy plant |
1 | 1~2片子叶表现病状,子叶变黄,真叶不显病状 1~2 cotyledons show disease symptoms, cotyledons turn yellow, true leaves do not show disease symptoms |
2 | 子叶和1片真叶表现病状Cotyledon and 1 true leaf show disease symptoms |
3 | 2片真叶表现病状 2 true leaves show symptoms |
4 | 全部叶片表现症状,严重时叶片脱落,顶心枯死 All leaves show symptoms, the leaves fall off and the top heart is dead when serious |
培养基 Medium | 土豆 Potato | 葡萄糖 Glucose | 蔗糖 Sucrose | NaNO3 | K2HPO3 | MgSO4 | KCl | FeSO4 |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
PD-50 | 50 | 3.125 | — | — | — | — | — | — |
PD-75 | 75 | 4.690 | — | — | — | — | — | — |
PD-100 | 100 | 6.250 | — | — | — | — | — | — |
PD-150 | 150 | 9.375 | — | — | — | — | — | — |
PD-200 | 200 | 12.500 | — | — | — | — | — | — |
PS-75 | 75 | — | 4.69 | — | — | — | — | — |
PS-200 | 200 | — | 12.50 | — | — | — | — | — |
Czapek | — | — | 30.00 | 3.00 | 1.00 | 0.50 | 0.50 | 0.01 |
表2 不同液体培养基配方 (g·L-1)
Table 2 Formulation of different Liquid culture media
培养基 Medium | 土豆 Potato | 葡萄糖 Glucose | 蔗糖 Sucrose | NaNO3 | K2HPO3 | MgSO4 | KCl | FeSO4 |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
PD-50 | 50 | 3.125 | — | — | — | — | — | — |
PD-75 | 75 | 4.690 | — | — | — | — | — | — |
PD-100 | 100 | 6.250 | — | — | — | — | — | — |
PD-150 | 150 | 9.375 | — | — | — | — | — | — |
PD-200 | 200 | 12.500 | — | — | — | — | — | — |
PS-75 | 75 | — | 4.69 | — | — | — | — | — |
PS-200 | 200 | — | 12.50 | — | — | — | — | — |
Czapek | — | — | 30.00 | 3.00 | 1.00 | 0.50 | 0.50 | 0.01 |
图1 不同枯萎病菌产孢量、孢子形态及致病力注:图中不同小写字母表示P<0.05水平差异显著。
Fig.1 Sporulation, spore morphology and pathogenicity of different Fusarium oxysporumNote: Different lowercase letters in the figure indicate significant differences at the P<0.05 level.
培养基 Medium | 孢子数Number of spores/(108 cfu·mL-1) | ||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
1 d | 2 d | 3 d | 4 d | 5 d | 6 d | 均值Average | |
PD-50 | 0.01 c | 0.48 c | 1.67 e | 3.64 b | 3.32 a | 3.44 a | 2.09 c |
PD-75 | 0.35 b | 2.74 a | 3.03 c | 3.17 bc | 2.89 b | 2.65 b | 2.47 b |
PD-100 | 0.01 c | 0.95 c | 2.01 e | 2.76 cd | 2.77 b | 1.41 c | 1.65 d |
PD-150 | 0.04 c | 1.16 c | 2.08 e | 2.28 de | 2.39 b | 2.07 b | 1.67 d |
PD-200 | 0.01 c | 0.65 c | 3.59 b | 1.61 d | 1.59 d | 2.20 b | 1.61 d |
PS-75 | 0.54 a | 2.71 a | 2.52 d | 2.26 de | 2.24 c | 2.24 b | 2.09 c |
PS-200 | 0.55 a | 1.91 b | 1.79 e | 1.50 d | 1.21 e | 1.02 c | 1.33 e |
Czapek | 0.08 c | 3.05 a | 3.96 a | 4.43 a | 3.59 a | 3.93 a | 3.17 a |
表3 不同培养基孢子数显著性分析
Table 3 Significance analysis of the number of spores in different media
培养基 Medium | 孢子数Number of spores/(108 cfu·mL-1) | ||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
1 d | 2 d | 3 d | 4 d | 5 d | 6 d | 均值Average | |
PD-50 | 0.01 c | 0.48 c | 1.67 e | 3.64 b | 3.32 a | 3.44 a | 2.09 c |
PD-75 | 0.35 b | 2.74 a | 3.03 c | 3.17 bc | 2.89 b | 2.65 b | 2.47 b |
PD-100 | 0.01 c | 0.95 c | 2.01 e | 2.76 cd | 2.77 b | 1.41 c | 1.65 d |
PD-150 | 0.04 c | 1.16 c | 2.08 e | 2.28 de | 2.39 b | 2.07 b | 1.67 d |
PD-200 | 0.01 c | 0.65 c | 3.59 b | 1.61 d | 1.59 d | 2.20 b | 1.61 d |
PS-75 | 0.54 a | 2.71 a | 2.52 d | 2.26 de | 2.24 c | 2.24 b | 2.09 c |
PS-200 | 0.55 a | 1.91 b | 1.79 e | 1.50 d | 1.21 e | 1.02 c | 1.33 e |
Czapek | 0.08 c | 3.05 a | 3.96 a | 4.43 a | 3.59 a | 3.93 a | 3.17 a |
图2 不同培养时间8种培养基孢子数平均值变化注:图中不同小写字母表示P<0.05水平差异显著。
Fig.2 Average number of Fusarium oxysporum spores by 8 culture media at different timeNote: Different lowercase letters in the figure indicate significant differences at the P<0.05 level.
培养基 Medium | 菌落直径Colony diameter/cm | 生长速率 Growth rate/(cm·d-1) | ||||
---|---|---|---|---|---|---|
2 d | 3 d | 4 d | 5 d | 6 d | ||
PDA-75 | 1.67 c | 2.56 b | 3.38 b | 4.23 c | 5.10 c | 0.86 b |
PSA-75 | 1.71 bc | 2.56 b | 3.38 b | 4.26 c | 5.17 c | 0.87 b |
PSA-200 | 1.73 b | 2.61 b | 3.52 b | 4.51 b | 5.36 b | 0.91 b |
Czapek | 2.21 a | 3.58 a | 4.94 a | 6.30 a | 7.36 a | 1.29 a |
表4 不同固体培养基菌落生长速率比较
Table 4 Comparison of growth rates of colonies in different solid media
培养基 Medium | 菌落直径Colony diameter/cm | 生长速率 Growth rate/(cm·d-1) | ||||
---|---|---|---|---|---|---|
2 d | 3 d | 4 d | 5 d | 6 d | ||
PDA-75 | 1.67 c | 2.56 b | 3.38 b | 4.23 c | 5.10 c | 0.86 b |
PSA-75 | 1.71 bc | 2.56 b | 3.38 b | 4.26 c | 5.17 c | 0.87 b |
PSA-200 | 1.73 b | 2.61 b | 3.52 b | 4.51 b | 5.36 b | 0.91 b |
Czapek | 2.21 a | 3.58 a | 4.94 a | 6.30 a | 7.36 a | 1.29 a |
培养基 Medium | 不同天数孢子数 Number of spores in different days(/108 cfu·mL-1) | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
2 d | 3 d | 4 d | 5 d | 6 d | 均值Average | |
PDA-75 | 0.91 aγ | 1.51 bαβ | 1.72 bα | 1.59 bαβ | 1.28 bβ | 1.41 ab |
PSA-75 | 0.76 abγ | 1.61 aα | 1.59 bα | 1.11 cβ | 1.19 bcβ | 1.26 b |
PSA-200 | 1.09 aγ | 1.95 aβ | 3.00 aα | 2.01 aβ | 1.75 aβ | 1.96 a |
Czapek | 0.49 bα | 0.77 cα | 0.83 cα | 0.93 cα | 0.83 cα | 0.77 b |
表5 不同固体培养基产孢数的差异显著性分析
Table 5 Significance analysis of the difference in the number of spores produced by different solid media
培养基 Medium | 不同天数孢子数 Number of spores in different days(/108 cfu·mL-1) | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
2 d | 3 d | 4 d | 5 d | 6 d | 均值Average | |
PDA-75 | 0.91 aγ | 1.51 bαβ | 1.72 bα | 1.59 bαβ | 1.28 bβ | 1.41 ab |
PSA-75 | 0.76 abγ | 1.61 aα | 1.59 bα | 1.11 cβ | 1.19 bcβ | 1.26 b |
PSA-200 | 1.09 aγ | 1.95 aβ | 3.00 aα | 2.01 aβ | 1.75 aβ | 1.96 a |
Czapek | 0.49 bα | 0.77 cα | 0.83 cα | 0.93 cα | 0.83 cα | 0.77 b |
培养基 Medium | 不同天数孢子数 Number of spores in different days /(108 cfu·mL-1) | |||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
1 d | 2 d | 3 d | 4 d | 5 d | 6 d | 7 d | 8 d | 9 d | 10 d | |
Czapek | 0.07 f | 3.06 e | 3.95 bc | 4.43 a | 3.59 d | 3.94 bc | 4.41 a | 4.09 b | 3.73 cd | 3.71 cd |
PD-75 | 0.04 f | 2.08 e | 2.79 cd | 3.49 a | 2.72 d | 3.27 ab | 2.80 cd | 3.07 bc | 2.69 d | 2.56 d |
表6 枯萎病菌在Czapek 和PD-75培养基不同培养天数之间产孢数的差异显著性分析
Table 6 Significance analysis of number of spores between different culture days on different media
培养基 Medium | 不同天数孢子数 Number of spores in different days /(108 cfu·mL-1) | |||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
1 d | 2 d | 3 d | 4 d | 5 d | 6 d | 7 d | 8 d | 9 d | 10 d | |
Czapek | 0.07 f | 3.06 e | 3.95 bc | 4.43 a | 3.59 d | 3.94 bc | 4.41 a | 4.09 b | 3.73 cd | 3.71 cd |
PD-75 | 0.04 f | 2.08 e | 2.79 cd | 3.49 a | 2.72 d | 3.27 ab | 2.80 cd | 3.07 bc | 2.69 d | 2.56 d |
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