检测禽β-防御素6夹心ELISA法的建立及应用

doi:10.13304/j.nykjdb.2014.084

›› 2014, Vol. 16 ›› Issue (4): 176-180.DOI: 10.13304/j.nykjdb.2014.084

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检测禽β-防御素6夹心ELISA法的建立及应用

梁瑞1,梁盈1,祁克宗1,王爱荣2,彭开松1*

(1.安徽农业大学动物科技学院, 合肥 230036|2.河北省唐山市丰润区农业畜牧水产局, 河北唐山 064000)

收稿日期:2014-02-20 修回日期:2014-04-23 出版日期:2014-08-15 发布日期:2014-07-10
通讯作者: 彭开松，副教授，博士,研究方向为动物病理学。E-mail：kaisongpeng@ahau.edu.cn
作者简介:梁瑞|硕士研究生|研究方向为动物病理学。E-mail:lemon-sweet1216@sohu.com。
基金资助:
国家自然科学基金青年基金项目（30800811）和安徽农业大学引进与稳定人才基金项目（yj2006-13）资助。

Establishment and Application of Sandwich ELISA Method for Detecting Avian Beta-defensin 6

LIANG Rui1, LIANG Ying1, QI Ke-zong1, WANG Ai-ronng2, PENG Kai-song1*

(1.College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei 230036|
2.Fengrun District Agricultural Animal Husbandry and Fishery Bureau of Tangshan City, HebeiTangshan 064000, Hebei, China)

Received:2014-02-20 Revised:2014-04-23 Online:2014-08-15 Published:2014-07-10

摘要/Abstract

摘要：

为定量检测禽β-防御素6（avian beta\|defensin 6，AvBD6），建立了AvBD6的双抗体夹心ELISA法，并应用于鸡血清中AvBD6浓度的检测。研究结果显示，包被抗体（鼠抗AvBD6 B细胞线性表位的多克隆抗体）、检测抗体（兔抗AvBD6氮端的多克隆抗体）和辣根过氧化酶(HRP)标记羊抗兔IgG的最佳工作稀释倍数分别为2 500、2 000和10 000，AvBD6在20~320 ng/mL的线性范围内，标准曲线回归方程为：y=12 024x-2 583，（R2=0.984 2）。对不同状态下鸡血清AvBD6浓度检测结果显示：ACTH（25 IU/kgBW）注射1 d后，对照组AvBD6浓度高于ACTH组；连续注射ACTH 5 d，对照组AvBD6浓度低于ACTH组，但二者间差异均不显著(P>0.05)。大肠杆菌感染后24 h和沙门氏菌感染后3 h、24 h，感染组AvBD6浓度均显著地高于对照组（P<0.05），表明AvBD6参与对大肠杆菌和沙门氏菌系统感染的抵抗。

关键词: AvBD6, 夹心ELISA, ACTH, 大肠杆菌, 沙门氏菌

Abstract:

To detect avian beta-defensin 6 (AvBD6) quantitatively, a sandwich ELISA method was established and applied to detect the concentration of AvBD6 in serum. The results showed that the optimal dilution of capture antibody (mouse anti\|B cell linear epitopes of AvBD6 polyclonal antibody), detecting antibody (rabbit anti\|N\|terminal of AvBD6 polyclonal antibody) and horseradish peroxidase (HRP)\|conjugated goat anti\|rabbit IgG was 2 500, 2 000 and 10 000, respectively. The standard curve regression equation was y=12 024x-2 583, (R2=0.984 2) in the linear detection range from 20 to 320 ng/mL. The serum AvBD6 concentration of control group was slightly higher than that of ACTH group(P>0.05) after 1 day of ACTH (25 IU/kg BW) injection, but the AvBD6 concentration of the control group was slightly lower than that of ACTH group(P>0.05) after 5 d of ACTH injection; and the effect was not significant. The serum AvBD6 concentration of infected group after 24 h of Escherichia coli exposure or 3 h and 24 h of salmonella exposure were significantly higher than that of the control group (P<0.05). Our results indicated that AvBD6 involved in the resistance to system infection of Escherichia coli and salmonella.

Key words: AvBD6, sandwich ELISA, ACTH, Escherichia coli, Salmonella

中图分类号:

Q511
R392-33

梁瑞1,梁盈1,祁克宗1,王爱荣2,彭开松1*. 检测禽β-防御素6夹心ELISA法的建立及应用[J]. , 2014, 16(4): 176-180.

LIANG Rui1, LIANG Ying1, QI Ke-zong1, WANG Ai-ronng2, PENG Kai-song1*. Establishment and Application of Sandwich ELISA Method for Detecting Avian Beta-defensin 6[J]. , 2014, 16(4): 176-180.

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Establishment and Application of Sandwich ELISA Method for Detecting Avian Beta-defensin 6

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